|
Autor/a
Lucana Meneses, Celia
|
Abstract
Los péptidos se encuentran entre los fármacos basados en moléculas pequeñas y biomoléculas terapéuticas, lo que les permite combinar lo mejor de estos dos mundos. Al igual que las proteínas, los péptidos pueden presentar una alta afinidad y selectividad y, al igual que las moléculas pequeñas, tienen una inmunogenicidad y unos costes de producción bajos, además son sintéticamente accesibles. El principal obstáculo para la aplicación generalizada de péptidos, es la baja resistencia a las proteasas de péptidos lineales convencionales hechos de aminoácidos proteinogénicos. Sin embargo, diversas estrategias de modificación química permiten superar esta limitación.
En esta tesis, nos centramos en aplicar la ciclación a diferentes péptidos que se dirigen al receptor de transferrina, con el objetivo de aumentar su resistencia proteolítica y afinidad.En el primer proyecto, teníamos como objetivo desarrollar péptidos bicíclicos puñados(stapled) con un andamio químico, para así mejorar el transporte de terapias a través de la barrera hematoencefálica, la cual representa el mayor reto en el desarrollo de fármacos dirigidos al sistema nervioso central. Hemos diseñado una pequeña biblioteca de péptidos cíclicos. Posteriormente, los producimos mediante síntesis en fase sólida, ciclación en solución, purificación mediante HPLC preparativo de fase reversa, y caracterización mediante UPLC-UV y MALDI-TOF. Descubrimos que la ciclación mejora la vida media en suero desde 2 horas del péptido original, hasta 7 horas en algunas versiones cíclicas. Más notablemente, la asociación celular se mejoró con todos los péptidos cíclicos,
aumentando la Kd aparente hasta 30 veces respecto a la versión lineal. Este aumento en la asociación celular fue independiente de la estabilización de la estructura secundaria evaluada por dicroísmo circular.
En el segundo proyecto, nuestro objetivo era generar péptidos cíclicos como agentes terapéuticos independientes, para proteger las células neurales isquémicas. Varios péptidos se diseñaron racionalmente basándose en la estructura hélice alfa-giro-hoja beta de la transferrina, la cual interviene en la interacción de esta proteína con su receptor. Los péptidos puñados y bicíclicos, se sintetizaron, purificaron y caracterizaron. El dicroísmo circular confirmó la estructura alfa hélice de los péptidos y la estabilización relativa proporcionada por el puñado. Los resultados de un ensayo de competición con transferrina mostraron que ninguno de los candidatos pudo competir con la proteína endógena, en la línea celular estudiada; por tanto, se estudiarán otras líneas con niveles más altos de este receptor.
|
|
