Molecular Characterization of L-Arabinose Isomerase from Lactococcus lactis KF147 and the development of a novel method for D-tagatose detection

Autor/a

Arranz Fíguls, Clara  

Abstract

La Dtagatosa es un azúcar poco común, pero con un creciente interés a nivel industrial que ha generado mucho esfuerzos por la búsqueda de rutas para su producción.
Al ser una cetohexosa, la Dtagatosa tiene un valor calórico bajo, pero su dulzor es muy similar al de la sacarosa. Gracias a sus múltiples propiedades y beneficios para la salud, recientemente ha recibido gran atención y desde hace 10 años se considera como un producto alimentario GRAS (Generally Recognised as Safe) reconocido por la FDA (Food and Drug Administration). Debido a su escasez en la naturaleza, la producción de Dtagatosa por métodos químicos o biológicos es un tema muy discutido en el campo. Para superar los inconvenientes que presenta la síntesis química, los métodos biológicos que utilizan la LArabinosa Isomerasa (AI) para convertir Dgalactosa en Dtagatosa se plantean como una alternativa más barata, ecológica y eficiente para la producción de este azúcar. Debido a la creciente necesidad de caracterización de esta enzima y al gran interés que presenta este azúcar, sus métodos de detección también son temas muy estudiados en la actualidad. Por ahora, los dos métodos más utilizados son mediante HPLC y un a través de un ensayo colorimétrico que requiere el uso de varios reactivos que incluyen ácidos fuertes. Ambos presentan desventajas o bien a lo que refiere a la preparación de muestras o la precisión de medición de estas. En esta trabajo de final de grado, la AI de Lactococcus lactis KF147 se ha caracterizado mediante la clonación de su gen en la cepa Lactococcus lactis MG1363 y se ha testado su actividad en un rango de diferentes temperaturas y pH. Como referencia para este estuduio, se ha utilizado la AI de Bacillus coagulans, una enzima muy bien caracterizada. Además, se ha propuesto un nuevo método para la detección de tagatosa que implica la reducción de una sal de tetrazolio que es soluble en agua, el WST8, gracias al poder reductor de este azúcar.
Los resultados muestran que existe una correlación lineal entre señal y concentración de azúcar en un rango más amplio que otros ensayos colorimétricos y también ha mostrado una interferencia insignificante con otros azúcares reductores. Ambos trabajos se encuentran todavía en estudio y lo estarán tras la defensa de esta tesis.

 

Director/a

Fornaguera Puigvert, Cristina
Salinas, Yolanda 

Estudios

IQS SE - Grado en Biotecnología

Fecha

2021-09-07