|
Autor/a
Soliva Dueso, Lluc
|
Abstract
Las enfermedades autoinmunes son, en los países desarrollados, unas de las más frecuentes. Detectarlas y diagnosticarlas precozmente es clave para mejorar la calidad de vida de los pacientes. Estas enfermedades se dividen en dos grupos: sistémicas y organo-específicas. De entre los diferentes criterios establecidos por el diagnóstico de las enfermedades sistémicas, uno de los más relevantes es la detección de anticuerpos antinucleares (Anti-Nuclear Antibody, ANA) en el suero de la sangre de los pacientes, y la técnica por excelencia o Golden Standard para detectarlos es el ensayo de inmunofluorescencia indirecta (Immuno Fluorescence Assay, IFA) en células HEp-2. Los patrones de fluorescencia que se producen durante la unión de los ANA en las células HEp-2 pueden relacionarse con diferentes enfermedades autoinmunes. Esta técnica también sirve para semi-cuantificar el apego de las enfermedades mediante diluciones seriadas (titulaciones) a razón 1:2 que suelen ir de 1/80 hasta 1/2650.
Hasta ahora, los IFA y sus titulaciones se realizaban mediante rutinas manuales, pero para agilizar el flujo de trabajo de los laboratorios de autoinmunidad se ha empezado a automatizar el proceso. Por este motivo, BioSystems S.A. ha desarrollado un procesador de muestras de IFA automático: el iPRO. El objetivo de este trabajo es aumentar la capacidad de procesado del iPRO manteniendo la calidad de lectura de las muestras. Actualmente, utilizándolo en su máxima capacidad de pacientes (65 muestras con dos titulaciones ─1/80 y 1/160─ en un total de once portaobjetos de 12 pouets) el tiempo de la rutina validada por BioSytems S.A. en ciertas condiciones es de 3h y 11min. Para definir la calidad de las muestras se ha utilizado un microscopio con un módulo de fluorescencia que, por medio de un software de imágenes, permite calcular la inmunofluorescencia normalizada (IFN(%)) de las muestras.La metodología de trabajo utilizada para reducir este tiempo, manteniendo la calidad, es la del diseño de experimentos. Para aplicar el método se han seleccionado ocho variables que repercuten en el tiempo total de procesado y son fáciles de controlar, estudiando el comportamiento de la rutina de referencia mediante pruebas de hipótesis y técnicas estadísticas. Concretamente, se ha definido la unidad de investigación, se ha analizado el comportamiento de los pouetes de cada dilución, la diferencia entre grupos de diluciones 1/80 y 1/160 dentro de un portaobjetos y el comportamiento entre portaobjetos. También, a fin de establecer el valor de IFN(%) a mantener se han realizado tres repeticiones genuinas de las que se ha extraído un valor de IFN(%) objetivo. Por último, se ha conseguido reducir a 2h y 10min el tiempo de procesado modificando las condiciones establecidas inicialmente en el protocolo.
|
|
