Clonning, periplasmic expression and functional assessment of an anti_CD133 single-chain variable antibody fragment

Autor/a

Sabartés Mirabete, Marc

Abstract

El glioblastoma multiforme es el tumor cerebral primario maligno más común. A pesar de los tratamientos actuales, los pacientes tienen una esperanza de vida media de 15 meses. La ineficacia de estas terapias reside fundamentalmente en dos motivos: la presencia de la barrera hematoencefálica, que restringe el acceso al área peritumoral, y la existencia de células madre de glioma (GSC), responsables de la recaída tumoral. Las nanoterapias dirigidas han abierto nuevos horizontes que pueden permitir hacer frente a estos retos. Sin embargo, dirigirse específicamente a las GSC es un desafío en si mismo porque los marcadores de superficie, como el CD133, también se expresan en células sanas. Es por ello por lo que nuestro grupo está trabajando en el desarrollo de derivados de anticuerpos contra marcadores de GSC que se activan solo en el lugar del tumor. Anteriormente, hemos producido fragmentos de anticuerpos monocatenarios anti-CD133 (scFvs) mediante el replegamiento de cuerpos de inclusión. En este trabajo de final de grado, expresamos mediante expresión periplasmica scFv anti-CD133 para comparar su afinidad de unión con los producidos mediante replegamiento. También clonamos distintas variantes de scFv anti-CD133 con diferentes tags de purificación y las expresamos y purificamos. Además, caracterizamos los scFv mediante electroforesis en gel y Western Blot. Finalmente, comparamos la capacidad de unión de estos scFv con la de los scFv replegados en células CD133 positivas y negativas.

 

Director/a

Oller Salvia, Benjamí
Lucchi, Roberta

Estudios

IQS SE - Grado en Biotecnología

Fecha

2021-06-20