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Autor/a Maestro Moral, Claudia |
Abstract El cáncer colorrectal (CCR) es el tercer tipo de cáncer más diagnosticado en los hombres y el segundo en las mujeres. Un factor importante en la predisposición al cáncer colorrectal es la herencia genética. El CCR hereditario incluye varios síndromes clasificados según sus características fenotípicas (síndromes polipósicos y no polipósicos) y genes causales. Tras la secuenciación de los exomas de tres miembros de una familia con poliposis mixta, varias variantes fueron seleccionadas según su presencia en todos los miembros de la familia afectados con poliposis, su frecuencia en controles poblacionales, su función, y su enriquecimiento en casos comparados con controles. Basándonos en estos criterios, PARP1 c.412C>T; p.Arg138Cys fue seleccionada como la posible causa del elevado riesgo de desarrollar poliposis en la familia estudiada. Se identificaron cuatro variantes predichas patogénicas adicionales en PARP1 en otras cohortes de pacientes con poliposis. El objetivo de este estudio es generar modelos celulares para probar el impacto funcional de las variantes PARP1 identificadas. La herramienta de edición genética CRISPR-Cas9 se utilizó para generar una línea celular heterocigota PARP1 knock-out (KO) y, posteriormente, una línea celular KO homocigota. La correcta edición génica se verificó mediante la secuenciación de los clones de cada línea celular, seguido de un análisis de expresión mediante RT-PCR cuantitativa y semi-cuantitativa y Western Blot (WB). Los modelos knock-in que incluyen las variantes en estudio en las células KO heterocigotas se están generando actualmente. La selección de los clones editados se realizará con los ensayos de genotipado KASP que hemos diseñado. |
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Director/a Semino Margrett, Carlos |
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Estudios IQS SE - Grado en Biotecnología |
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Fecha 2021-06-17
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