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Autor/a
Peciña Vaquero, Inés
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Abstract
El Glioblastoma multiforme (GBM) es el tumor cerebral más maligno, cuya esperanza de vida por debajo de los 15 meses. Los tratamientos actuales que incluyen resección del tumor seguida de una combinación de radioterapia y quimioterapia son insuficientes para evitar la recidiva del tumor. Las quimioterapias se enfrentan a dos grandes retos: la liberación del fármaco en el frente del tumor, fuertemente restringido por la barrera hematoencefálica (BHE), y la resistencia a la quimioterapia, principalmente causada por una subpoblación de células, las células madre cancerígenas (CMCs). Esta tesis es parte de un proyecto europeo cuyo objetivo es crear una nanoterapia capaz de superar estas limitaciones para el tratamiento del GBM.
En esta tesis nos hemos centrado en desarrollar dos familias de péptidos para superar cruzar la BHE y targetear las CSCs. LS7 y CBP4, péptidos cuya diana es el receptor CD133, uno de los principales marcadores de las CSCs, han sido identificados y sintetizados. Para ello, hemos desarrollado un procedimiento de obtención de péptidos a través de la técnica de síntesis en fase sólida, purificación mediante HPLC preparativo y caracterización mediante UPLC-UV y MALDI-TOF. Luego mostramos que la interacción de una versión marcada de CBP4 con células que expresan altos niveles de CD133 puede disminuirse en un ensayo de competición con CBP4 sin marcar, lo cual refuerza la hipótesis de que este péptido interactúa con CD133. Posteriormente, conjugamos CBP4 con GFP para mostrar que este péptido tiene el potencial de dirigir grandes cargos a células que expresan altos niveles de CD133. Finalmente, estudiamos la estabilidad del CBP4 en suero y proponemos modificar el extremo N-terminal para mejorar su capacidad de direccionamiento. En cuanto a péptidos que cruzan la BHE, identificamos un péptido cuya diana es el receptor nAchR. Este péptido se ha sintetizado y caracterizado, pero no se ha encontrado ningún tipo de interacción con receptor en la línea celular estudiada.
En conclusión, hemos establecido un procedimiento para sintetizar, purificar y caracterizar péptidos. Los ensayos en células, indican que CBP4 puede ser usado para dirigir cargos contra células que sobre expresen CD133. Los resultados obtenidos y el procedimiento de producción de péptidos establecidos serán clave para generar nuevos péptidos dirigidos contra CMCs o para cruzar la BHE con el fin de elaborar tratamientos más eficaces para el GBM.
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